Taq DNA Polymerase

Taq DNA Polymerase

概述
本公司生产的Taq DNA Polymerase是从克隆有Thermusaquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白,其分子量为94 KD。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和5’→3’核酸外切酶活性,无3’→5’核酸外切酶活性。在PCR反应中,该酶的延伸速度为1-2kb/分钟,PCR产物3’端带A,可直接用于T/A载体克隆。该酶无外源核酸酶和细菌基因组DNA污染,稳定性好,特异性强,一般用于小于6kb的对保真度要求不高的DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等。


产品规格
产品名称 目录号 规格
Taq DNA Polymerase TD101-01 250 units
Taq DNA Polymerase TD101-02 500 units
Taq DNA Polymerase TD101-03 5×500 units

来源
本Taq DNA Polymerase为recombinant Taq DNA Polymerase,通过大肠杆菌表达纯化获得,和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。

用途
PCR、DNA标记和测序等。
本Taq酶可以扩增长度达5 kb的DNA片断,最长可以扩增长达8kb的DNA片断。通常适合扩增3kb以下的DNA片断。用本Taq酶扩增产生的PCR产物带有3’-dA overhangs,可以用于基于T载体的PCR片断克隆。PCR反应过程中可以掺入生物素、地高辛或一些荧光机团标记的脱氧核苷酸,即可以用核酸的标记反应。
本Taq酶除用于各种PCR扩增以及DNA标记外,还可以用于DNA测序。

纯度
不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。


保存条件
-20℃保存。

注意事项
1. 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染;
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明
1. PCR反应体系的设置
a. 溶解并混匀PCR反应所需的各种溶液,将Taq DNA Polymerase 置于冰浴上或冰盒内。
b. 参考下表在冰浴上设置PCR反应(如果有多个类似的PCR反应,可以先配置大体积的包含水、buffer、dNTP和Taq酶的混合物,然后分装到各PCR反应管内。根据情况,有时混合物中可以包括引物):
试剂 最终浓度 体积
双蒸水或MilliQ水 - (36.75-x)ul
10xPCR Buffer(with Mg2+) 1x 5ul
dNTP(2.5mM each) 0.2mM each 4ul
模板DNA 10pg-1ug* xul
引物混合物(10uM each) 0.8uM 4ul
Taq DNA Polymerase(5U/ul) 1.25U/50ul 0.25ul
总体积 - 50ul

c. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。

d. 将设置好的PCR反应管置于PCR仪上,开始PCR反应。

2. PCR反应参数的设置可以参考如下示例:
STEP1(起始变性):94℃   3min
STEP2(变性):94℃ 30sec
STEP3(退火):55℃  30sec
STEP4(延伸):72℃  1min
STEP5(循环):go to step 2 for 30cycles
STEP6(最终延伸):72℃  10min
STEP7(临时保存):4℃  forever






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